腫瘤痛15大著數[year]!內含腫瘤痛絕密資料
如請求項1所述的抗體或其抗原結合片段,其中,所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、(Fab’) 2、Fv、二硫鍵連接的Fv、scFv、雙抗體(diabody)和單域抗體(sdAb);和/或,所述抗體為鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。 結果如圖18所示,與人鼠嵌合抗體42F5-Chi相似,抗TrkA抗體42F5人源化抗體可以結合到TrkA/CHO細胞,但不能結合到TrkB/CHO,TrkC/CHO以及CHO-K1細胞,說明人源化抗TrkA抗體的特異性良好。 按照產品說明書培養細胞,在對數生長期收集細胞,使用流式緩衝液(PBS+2%FBS, 腫瘤痛 pH 7.4)重懸細胞,在96孔板中每孔加入10 5細胞(50μl),並加入50μl 的100μg/mL的人源化抗TrkA抗體,室溫孵育60min,採用1200rpm轉速離心棄去上清並洗滌細胞3次。 FITC標記的山羊抗人Fc抗體(Abcam,ab97224)用流式緩衝液稀釋至5μg/mL,用以重懸細胞,室溫避光孵育30min,離心棄去上清並洗滌3次,用7AAD溶液(Biolegend,420403)重懸細胞,室溫孵育10min後使用流式細胞儀(BioRad, ZE5)檢測抗體的結合情況。 使用含有鼠Fc的人TrkA胞外區(33-417)蛋白研究抗TrkA抗體42F5人源化抗體的親和力,96孔酶標板每孔包被50ng人TrkA,洗滌及封閉後加入梯度稀釋的人源化抗體,室溫孵育1小時。 洗滌三次後加入辣根過氧化物酶偶聯山羊抗人IgG抗體(ThermoFisher,A18817),室溫反應1小時,三次洗滌後加入四甲基聯苯胺(TMB,Biolegend)顯色,1M HCl終止顯色,酶標儀讀取450nm處吸光值。 10,000ng nM)抗TrkA抗體依次3倍稀釋10個濃度至0.17ng/mL (0.0011 nM),每孔加入100μL,孵育30分鐘後每孔加入100μL的1μg/mL的生物素標記人NGF,室溫孵育1小時,洗滌三次。 加入鏈黴親和素標記辣根過氧化物酶(Streptavidin-HRP,Biolegend,405210)孵育0.5小時,洗滌三次後酶標板中加TMB,顯色終止後酶標儀讀取450nm吸光值。 如請求項5所述的抗體或其抗原結合片段,其中,所述人源化抗體為42F5-01、42F5-03、42F5-04、42F5-05、42F5-08、42F5-11、42F5-13、42F5-14或42F5-15。 腫瘤痛 結合情況如表9和圖17所示,不同序列的抗TrkA抗體42F5人源化抗體均與人TrkA有相似的結合,結合程度與人鼠嵌合抗體42F5-Chi(含鼠源抗TrkA抗體42F5可變區和人抗體恒定區)相當。 腫瘤痛: 腫瘤痛 基於現有技術的不足,本發明的主要目的在於提供一種親和力更高,特異性更強的抗TrkA抗體。 本發明還提供了所述抗體的製備方法和用途,本發明的抗TrkA抗體可以用於治療疼痛,包括炎症性疼痛、術後痛、神經病理痛、癌症疼痛、骨關節炎等。 與現有技術相比,本發明研發的抗TrkA抗體或其抗原結合片段具備更高的親和力高、更好的特異性和更強的活性。 大约60%的人在使用任意一种NSAID后症状会有所改善,在一种药物不起作用时,通常推荐试用其他药物。 氯喹(Chloroquine),是一種用於治療及預防疟疾的藥物,该药以磷酸盐的形式(即磷酸氯喹)应用于临床。 偶爾也會用於治療腸道外的阿米巴原蟲症(英语:amebiasis)、類風濕性關節炎,以及紅斑性狼瘡。 如請求項10所述的方法,其中,所述疼痛與以下任意一種相關:炎症性疼痛、術後痛、神經病理痛、癌症疼痛。 儘管已經對本發明的具體實施方式進行了詳細說明和描述,但應當認識到,本發明不受所述具體實施方式的限制。 序列分析得到Kabat及IMGT系統界定的CDR,下表(表7)基於Kabat及IMGT系統的定義列出八個抗TrkA抗體的CDR。 腫瘤痛: 腫瘤痛 隨後每組分別皮下注射生理鹽水、抗TrkA抗體33H5、抗TrkA抗體42F5,劑量10mg/kg,並測定給藥後24小時及48小時的痛閾(圖15,16),評價受試物對痛閾的影響。 8個鼠源抗TrkA抗體與TrkA(圖10)有高親和力,與TrkB(圖11)及TrkC(圖12)基本無結合。 腫瘤痛 8個雜交瘤分泌的抗TrkA抗體均以劑量依賴的方式結合至人TrkA胞外區(圖1),8個抗體與人TrkA結合的EC50如表1。 優選地,所述宿主細胞是哺乳動物細胞,更優選為人、鼠、羊、馬、狗或貓的細胞,進一步優選為中國倉鼠卵巢細胞。…
