15.权利要求12所述的方法，其中高效复合干扰素以口服、静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、经鼻或粘膜给药、或者经呼吸器吸入的方式给药。 3.2 腹部癌 含有浓度≥每毫升10纳克(ng/ml)的rSIFN-co的实验孔中的细胞没有细胞病变，形态与正常细胞相似。 聚乙二醇化是指将聚乙二醇链与蛋白质和肽类药物连接，通过使这些蛋白和肽类药物避开水解酶从而提高药物代谢动力学指标的过程。 参见Harris和Chess，聚乙二醇化对药物的影响，Nat Rev Drug Discov.2003 Mar；2：214-21. 以下是一些rSIFN-co的制剂：片剂、胶囊、口服液、糊剂、注射剂、喷雾剂、栓剂以及溶液。
- 2006年1月4日进行的检查也没有发现好转。
- 经过一个月的化疗后，2005年10月22日和2005年10月25日进行的影像检查没有发现好转。
- “外源性”与阿拉伯糖的剂量之间的关系是线性的。
- 当在体内使用时，其具有更广泛临床应用范围以及更长的生物应答效应。
- 第2组在埃博拉病毒接种后1天用1μg rSIFN-co治疗。
- 所述宿主细胞可以是真核的或原核的，例如大肠杆菌。
- 这是一种传染性的上呼吸道病毒感染，其特征是粘膜发炎、打喷嚏、以及喉咙痛。
- 在另一个实施方案中，rSIFN-co皮下或肌肉内给药剂量高于或等于每平方米表面积2×107国际单位。
药物载体可以是任何可接受的药物载体，包括糖类、纤维素、粘合剂、崩解剂、软化剂、填充剂、助溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂、调配剂等。 病毒性上呼吸道感染，又名普通感冒、感冒。 这是一种传染性的上呼吸道病毒感染，其特征是粘膜发炎、打喷嚏、以及喉咙痛。 它通常由超过200种称之为鼻病毒的不同病毒引起。
腹部癌: 腹部
因此，通过阿拉伯糖控制大肠杆菌中外源性基因表达水平要比通过改变温度和pH来控制更容易。 腹部癌 L-阿拉伯糖来源丰富、便宜而且安全，相反，这些是其它诱导剂例如IPTG的缺点。 本发明提供一种预防或治疗受试者的由病毒诱发的疾病的方法，包括向受试者给予有效量的重组高效复合干扰素或其功能上的等效物。 非典型肺炎，又称为严重急性呼吸道综合征，其在中国广东省被首次发现，爆发并扩散至几个国家。 从2003年2月和3月起，在香港、越南和加拿大的病人中检测到相似的病例。
- 作者指出，在某些病人中用聚乙二醇化的干扰素进行单独治疗要比用非聚乙二醇化制剂进行单独治疗产生更好的反应。
- 该方法进一步包括纯化的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的冻干。
- 本发明提供一种包含载体的表达体系，该载体包含编码高效复合干扰素或其等效物的基因。
- 参见Baker，聚乙二醇化干扰素，Rev GastroenterolDisord.2001；1：87-99。
- 因此，对于干扰素的给予，市售时采用喷雾器的形式要比经口服或注射更安全、更有效。
- 商业上可获得的Invitrogen表达试剂盒包含被设计成对表达水平进行精确控制的pBAD载体。
- 本发明提供一种预防或治疗受试者的由病毒诱发的疾病的方法，包括向受试者给予有效量的重组高效复合干扰素或其功能上的等效物。
2006年2月23日进行的检查表明有迅速的好转。 为了得到纯rSIFN-co蛋白，rSIFN-co的cDNA被克隆到大肠杆菌高表达载体中，能够激活载体中的强效PBAD启动子的L-阿拉伯糖被用于诱导rSIFN-co基因的高表达。 就本发明的目的而言，“药学上可接受的载体”是指任何标准的药用载体。
腹部癌: 腹部・消化器の検査
此外，四川省的医生和护士、居民或其它使用过高效复合干扰素喷雾剂的机构中无人感染SARS。 2.重组高效复合干扰素(rSIFN-co)能够调节免疫反应，包括T细胞免疫反应、天然杀伤细胞的活性、单核体的噬菌作用，甚至体内某些抗体的形成。 腹部癌 重组高效复合干扰素(rSIFN-co)抑制乙型肝炎病毒的DNA复制以及HBsAg和HBeAg的分泌。
本发明还提供编码高效复合干扰素或其等效物的人工基因。 许多生成核苷酸序列的方法以及其它分子生物学技术先前已经有记载。 此外，与其它可用的干扰素相比，rSIFN-co能以较小的副作用有效地预防和/或治疗病毒性疾病和肿瘤。 腹部癌 4.权利要求3所述的高效复合干扰素，其抑制乙型肝炎病毒的DNA复制以及HBsAg和HBeAg的分泌是通过体外途径实现的。
腹部癌: CN101137391A – 重组高效复合干扰素的用途
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)还可以利用其基因来制备，即根据大肠杆菌的密码子偏好性对野生序列进行调整并人工合成cDNA。 关于所述密码子选择(偏好)的广泛讨论见第4,695,623号美国专利。 腹部癌 参见，例如第6栏第41行至第7栏第35行。 5.权利要求1-3中任一项所述的高效复合干扰素，其还包含试剂或被试剂包封，所述试剂能够影响所述干扰素的半衰期或输送。 3.1 在倒置显微镜下，加入流感病毒且不含有干扰素的对照孔中的细胞具有明显的细胞病变，例如细胞变圆、细胞坏死、反射光减少和脱落。 缓释输送基质和脂质体可以与rSIFN-co一起用来制造缓释和控制释放制剂。
腹部癌: 腹部膨満ふくぶぼうまん（感）への対策
2.3 移去上清液，向每个孔中加入100μl(微升)不同浓度的rSIFN-co。 使用两种对照组：磷酸缓冲盐溶液和生长培养基。 2.1 获得对数生长期的293-CD4-CCR5细胞，用0.25％的胰酶消化，以苔盼兰染色确定细胞数量，并且以DMEM稀释至细胞浓度为每毫升2.0×105个(细胞/ml)。 然而，本领域技术人员很容易理解，所讨论的特定方法和结果仅仅是对本发明的说明，之后的权利要求对本发明有更全面的描述。
腹部癌: 腹部膨満（感）があるときの工夫
这样，聚乙二醇化的干扰素与非聚乙二醇化的干扰素相比，其生物活性的持续期间增加了，因此具有了非聚乙二醇化干扰素所不具备的给药频率较少和顺应性较好的优点。 作者指出，在某些病人中用聚乙二醇化的干扰素进行单独治疗要比用非聚乙二醇化制剂进行单独治疗产生更好的反应。 参见Baker，聚乙二醇化干扰素，Rev GastroenterolDisord.2001；1：87-99。 令人惊奇地发现，立体结构已经改变的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)是不仅抑制乙型肝炎DNA复制，还抑制2.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌的制剂。 该方法可以包括从发酵液中提取重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，收集包涵体，对收集的蛋白质进行变性和复性。
腹部癌: 腹部画像診断～ 早期肝癌のCT・MRを中心に～
包含这些载体的组合物用熟知的常规方法进行配制。 即使当重组高效复合干扰素(rSIFN-co)与试剂一起并且以特定的浓度使用时，该方法仍可以保持高效率。 该方法还包括重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的分离和纯化。 该方法进一步包括纯化的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的冻干。 该方法包括重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的注射液的制备。
腹部癌: 腹部画像診断～ 早期肝癌のCT・MRを中心に～
温度和pH的变化以及加入IPTG不能直接激活启动子。 在本发明公开的体系中，L-阿拉伯糖不仅使PBAD启动子的转录去活化和被抑制，而且使其活化，而pBAD启动子的转录诱导了rSIFN-co的高表达。 因此，阿拉伯糖诱导/激活体系是一种更有效的表达体系。 “外源性”与阿拉伯糖的剂量之间的关系是线性的。 这就意味着可以改变阿拉伯糖的浓度以调节外源性基因的表达水平。
腹部癌: 腹部
参见Robinson和Talmadge，生长因子的缓释，体内 2002 Nov-Dec；16：535-40。 作者指出，聚乙二醇化和缓释输送基质和脂质体改善了重组分子的药物代谢动力学和药效学特征，因此这些方法通过改善临床功效提高了病人的顺应性。 本发明提供的上述方法中，重组高效复合干扰素(rSIFN-co)以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经喷雾器或呼吸器吸入的方式给药。 重组高效复合干扰素(rSIFN-co)可以以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经喷雾器或呼吸器吸入的方式给予。
腹部癌: 腹部膨満ふくぶぼうまん（感）への対策
本发明提供了一种预防和/或治疗SARS的方法。 IFN-con是一种根据人类α干扰素亚型的保守性氨基酸，利用基因工程的方法构建的新型干扰素分子。 已经证实，IFN-con具有广谱的干扰素活性，例如高抗病毒和肿瘤抑制活性，特别是用于有效治疗丙型肝炎。 本发明还提供一种抑制肿瘤的方法，其包括将有效量的高效复合干扰素与所述病毒或细胞接触。
腹部癌: CN101137391A – 重组高效复合干扰素的用途
这个实施方案制备了一种带有L-阿拉伯糖诱导/激活体系的表达有效的并具有抗性的rSIFN-co的大肠杆菌工程菌株。 在适宜的条件下，培养和发酵该菌株，收集菌体。 腹部癌 经过包涵体变性和复性以及一系列纯化步骤，最终得到了大量用于本发明和临床治疗的高纯度、立体构型改变的rSIFN-co蛋白质。
腹部癌: 腹部・消化器の検査
图4.使用EXCEL程序设计的rSIFN-co抑制抗药性HIV的图，其中荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴。 图3.使用EXCEL程序设计的rSIFN-co抑制野生型HIV的图，其中荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴。 2.1 取10天龄的对数生长期的鸡胚膜细胞，用0.25％的胰酶消化，以苔盼兰染色确定细胞数量，并且以DMEM稀释至细胞浓度为每毫升2.0×105个(细胞/ml)。 2.5 实验孔：以每板100μl(微升)的量将不同浓度的野生型HIV和抗药性HIV病毒加入每个孔中。
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对于儿童而言，呼吸道合胞病毒和副流感病毒是导致上呼吸道感染的两个主要原因。 高效复合干扰素(rSIFN-co)可以以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经呼吸器吸入的方式给药。 2.2 96孔板的每个孔中加入100μl(微升)的293-CD4-CCR5的DMEM悬浮液。
本发明提供一种预防或治疗受试者的肿瘤的方法，其包括给予受试者有效量的重组高效复合干扰素或其功能上的等效物。 本发明还提供一种抑制病毒诱发的疾病的方法，包括将有效量的高效复合干扰素与所述病毒或细胞接触。 在一个实施方案中，运用重组技术制备重组高效复合干扰素(rSIFN-co)。
在氨基酸序列确定的条件下，根据大肠杆菌的密码子选择来重新设计干扰素的DNA，然后人工合成rSIFN-co基因。 通过DNA重组技术将rSIFN-co的cDNA克隆到大肠杆菌的高表达载体中，通过利用L-阿拉伯糖激活PBAD启动子转录的诱导/激活机制来获得rSIFN-co的高表达。 本发明提供一种包含基因的载体，该基因编码高效复合干扰素或其等效物。 本发明提供一种包含载体的表达体系，该载体包含编码高效复合干扰素或其等效物的基因。
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本发明提供一种具有改变的立体构型、高功效和低副作用的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)及其等效物。 背景：埃博拉病毒是一种众所周知可导致可怕的症状的致命性病毒，最显著的症状是高烧和大范围内出血。 它是能够引起出血性(流血的)发烧的病毒之一。 这包括平衡病人的体液和电解质，维持他们的氧水平和血压，治疗他们的任何并发感染。 聚乙二醇化是一种基于聚乙二醇的大流体力学体积来提高蛋白质和脂质体药物的循环半衰期的成熟方法。
腹部癌: 腹部・消化器の検査
在一个特定的实施方案中，装置如图11所示。 本申请记载的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)包括但不限于干扰素α、β、γ或ω。 在一个实施方案中，它是指IFN-1α、IFN-2β或其它突变体。 16.权利要求12-15中任一项所述的方法，其还包括试剂或被试剂包封，该试剂能够影响所述干扰素的半衰期或输送。 在另一个实施方案中，病毒是人体免疫缺陷病毒，有效量低至每毫升4纳克。 在另一个实施方案中，病毒是流感病毒，有效量低至每毫升10纳克。
所述的纯化不会影响纯化的蛋白质的生物活性。 本发明提供一种组合物，其包含有效量的能够抑制、预防或治疗病毒诱发的疾病的高效复合干扰素，以及适合的载体。 本发明公开了重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，及其制备方法和用途。 特别是，本发明公开的高效复合干扰素能够抑制、预防和/或治疗肝炎病毒、SARS病毒、或者病毒诱发的上呼吸道疾病、例如禽流感病毒的流感病毒以及埃博拉病毒。
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商业上可获得的Invitrogen表达试剂盒包含被设计成对表达水平进行精确控制的pBAD载体。 通过arac基因的产物进行正向和反向的调节，所述araC基因的产物是与L-阿拉伯糖形成复合物的转录调节子。 当阿拉伯糖不存在时，AraC二聚体接触araBAD操纵子的02和I1半位点，形成210bp的DNA环。
图5.rSIFN-co对流感病毒的抑制：左边显示对照孔，其中加入流感病毒，不加干扰素，细胞具有明显的细胞病变，例如细胞呈圆形，细胞坏死，反射光减少和出现脱落现象。 右边显示实验孔，其中包含流感病毒和浓度为每毫升10纳克(ng/ml)的rSIFN-co，并具有与正常细胞类似的形态。 8.权利要求7所述的组合物，其中病毒是严重急性呼吸道综合征病毒、人体免疫缺陷病毒、埃博拉病毒或流感病毒。 RSIFN-co能够以≥每毫升4纳克(ng/ml)的水平抑制HIV。 以荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴，使用EXCEL程序作图，其清楚地显示出在rSIFN-co≥每毫升4纳克(ng/ml)的水平下，荧光素酶活性水平明显低于PBS和培养基对照组。 干扰素的聚乙二醇化提高了干扰素在体内保存的时间，这是通过增加干扰素分子的尺寸从而使干扰素的吸收率降低、半衰期延长和清除率降低而实现的。
腹部癌: 腹部
适合的载体的例子是本领域中熟知的，可以包括但不限于任何标准的药用载体，例如磷酸盐缓冲盐溶液和各种润湿剂。 其它的载体可以包括用于片剂、颗粒剂、胶囊等的添加剂。 典型地这些载体包含赋形剂，例如淀粉、乳、糖、某些类型的粘土、明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸镁或硬脂酸钙、滑石、植物脂肪或油、胶质、乙二醇或其它已知的赋形剂。 这些载体还可以包括香味添加剂和着色剂或其它成分。