預防亦可包括減少患者或個體中出現疾病狀態或病狀之可能性及阻礙或阻止該疾病狀態或病狀之發作。 圖10A及B顯示本發明hMZ-2Lw及MK1抗體對TOV21G細胞(卵巢癌細胞株)之抗原依賴性細胞介導之細胞毒性活性。 圖9A及B顯示本發明hMZ-2Lw及MK1抗體對MCF-7細胞(乳癌細胞株)之抗原依賴性細胞介導之細胞毒性活性。 所有確定之專利案及其他公開案明確地以引用的方式併入本文中，目的在於描述及揭示(例如)可與本發明相關之此等公開案中所述方法。
同樣，如本文所使用，術語「約」通常意指在給定值或範圍之10%、5%、1%或0.5%內。 或者，當由一般技術者考量時，術語「約」意指在平均值之可接受標準差內。 腫瘤照片 腫瘤照片 除在操作/有效實例中以外，或除非另有明確規定，否則本文所揭示之所有數值範圍、量、值及百分比(諸如彼等材料之用量、持續時間、溫度、操作條件、量之比率及其類似物者)應 理解為在所有情形下經術語「約」修飾。 因此，除非有相反指示，否則述於本發明及附隨申請專利範圍中之數字參數為可視需要變化之近似值。
然後用1x PBS清洗此等細胞三次，並再懸浮於培養基中至2×105個/mL。 將一百微升細胞轉移至轉移盤之插片中，並在CO2培養箱中培育24小時。 圖14顯示，MZ-2抗體抑制表現Globo H之TOV21G細胞之遷移。 藉由Biolayer干涉儀，使用FortrBio OcTet系統檢測抗-Globo H抗體之結合親和力。 簡而言之，首先將感測器浸泡於20μM生物素化Globo H中，以將Globo H塗佈於其表面上。
因此，此等技術係用於單離單株抗體之習知單株抗體融合瘤技術之可行替代。 在一態樣中，本發明提供一種輕鏈可變區，其包括選自由SEQ ID NO：10至13組成之群之L-CDR1、選自由SEQ ID NO：14至16組成之群之L-CDR2及選自由SEQ ID NO：17至19組成之群之L-CDR3。 在另一實施例中，本發明提供一種輕鏈可變區，其包含作為L-CDR1之SEQ ID NO：12、作為L-CDR2之SEQ ID NO：16及作為L-CDR3之SEQ ID NO：18。 在一態樣中，本發明提供一種重鏈可變區，其包括包含選自由SEQ ID 腫瘤照片 NO：1至4組成之群之H-CDR1、選自由SEQ ID NO：5及6組成之群之H-CDR2及選自由SEQ 腫瘤照片 ID NO：7至9組成之群之H-CDR3之重鏈可變區。 在另一實施例中，本發明提供一種重鏈可變區，其包含作為H-CDR1之SEQ ID NO：3、作為H-CDR2之SEQ ID NO：5及作為H-CDR3之SEQ ID NO：8。
圖1A至E中提供之結果顯示，MZ-2融合瘤所產生之單株抗體(參見圖1C)(下文為MZ-2抗體)對MCF-7細胞具有良好結合親和力。 為了比較，亦分析市售抗-Globo H IgG3抗體(參見圖1E)、VK9抗體(參見圖1B)。 選擇用於製造人源化抗體之人類可變域(輕鏈及重鏈)對減少抗原性極為重要。
向個體投與該抗體或包含其之醫藥組合物賦予該個體被動保護，且因此為癌症(諸如腫瘤相關醣類表現癌；較佳地，乳癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、結腸直腸癌及肺癌)提供預期療效。 此外，如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分可植入患者內或用藥物遞送系統注射。 例如，其可藉由給測試個體注射本發明Globo H共軛物，然後單離表現具有期望序列或功能特性之抗體之融合瘤製備。 如本文所使用，「互補決定區」(CDR，亦即CDR1、CDR2及CDR3)係指抗體可變域之胺基酸殘基，其存在係結合抗原所必要。 各可變域通常具有三個確定為CDR1、CDR2及CDR3之CDR區。
- 有效量可以(例如)公克、毫克或微克表示，或表示為毫克/千克體重(mg/kg)。
- 在另一實施例中，抗體或抗體片段可自利用已知之習知技術產生之抗體噬菌體集合庫中單離；例如使用噬菌體集合庫分別單離鼠科及人類抗體。
- 輕鏈恆定區域及重鏈恆定區域賦予重要的生物性質，諸如抗體鏈締合、分泌、經胎盤活動性、互補結合及結合至Fc受體。
- 因此，此等技術係用於單離單株抗體之習知單株抗體融合瘤技術之可行替代。
根據本發明之一實施例，該醫藥組合物包含治療上有效量之如本發明之任何上述態樣/實施例之抗體，及視情況醫藥上可接受之載劑。 一種如請求項1至16中之任一單離之抗-Globo H抗體或其抗原結 合部分之用途，其係用於製造供治療及/或預防Globo 腫瘤照片 H-陽性癌症之藥物。 簡而言之，在0.5mL培養基中混合2×105個表現Globo H之TOV21G細胞及5μg小鼠IgG1同型物或MZ-2抗體(hMZ-2Lw)，並在37℃下培育15分鐘。 腫瘤照片 然後用1x PBS清洗彼等細胞三次，並再懸浮於培養基中至4×105個/mL。
至少，各數字參數應至少根據所報告之有效數字及藉由應用普通捨入法理解。 如請求項11之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包括包含由SEQ ID NO：90組成之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO：135組成之胺基酸序列之輕鏈可變區。 使如本文所述之具有重鏈可變區及輕鏈可變區之本發明抗體接受實例2之結合親和力分析、實例5之締合及解離分析、實例6之CDC分析、實例7之ADCC分析及實例8之抗腫瘤分析，且顯示與cMZ-2抗體、hMZ-2Lw抗體及MK-1抗體類似之結果。 例如，具有SEQ ID NO：27之重鏈可變區及SEQ ID NO：231之輕鏈可變區的抗體之KD值係在1 x 10-7至1 x 10-10nM之範圍內。 片語「醫藥上可接受的」係指彼等在合理範圍的醫療判斷下適於與人類及動物組織接觸而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問 題或併發症，且符合合理的效益/風險比之化合物、材料、組合物及/或劑型。 各載劑必須在與調配物之其他成分相容之意義上係「可接受」且對患者不會造成傷害。
抗免疫原性醣肽之抗體，包含彼等之組合物及其用途 本發明係關於癌症之免疫療法領域。 更特定言之，本發明係關於抗免疫原性醣肽之抗體，含該抗體之醫藥組合物及其於癌症療法中之用途。 在RPMI 1640培養基中，將MCF-7、TOV21G Globo H(+)及HPAC細胞調整為2 x 106個細胞/mL，並將50μL稀釋細胞之等分試樣添加至流管中。 在RPMI 1640培養基中，將嵌合MZ-2抗體稀釋至2x指定濃度，並將50μL等分試樣添加至各具有癌細胞之流管中。 將人類IgG(Fitzgerald，31-AI06)稀釋至相同濃度作為對照。 15分鐘後，將100μL來自健康人類提供者之正常人類血清添加至各管中，並在37℃下培育2小時。
具體的有效或充足量將隨以下因素而變化：諸如接受治療之特定病狀、患者之身體條件(例如患者之體質量、年齡或性別)、接受治療之哺乳動物或動物類型、治療持續期、並行療法(若有)之性質及所用具體調配物及化合物或其衍生物之結構。 Globo H係一種六醣且屬於大量過度表現於各種上皮癌細胞(包括乳癌細胞、結腸癌細胞、卵巢癌細胞、胰臟癌細胞、肺癌細胞及前列腺癌細胞)表面上之腫瘤相關聯醣類抗原。 Globo H之異常表現使其成為免疫療法及研發Globo H-陽性癌症之癌症疫苗之吸引人候選者。
將MZ-2純系(mMZ-2)、小 鼠-人類嵌合MZ-2純系(cMZ-2)及人源化MZ-2純系(hMZ-2L、MK-1或hMZ-2Lw)連續稀釋至1333、444.4、148.1、49.4及16.5nM，並分別與塗佈Globo H之感測器培育。 腫瘤照片 圖5A及B顯示對MZ-2抗體進行生物感測器完整結合動力學分析。 詳細結合動力學參數(締合速率，ka，解離速率，kd，及親和力常數，KD)係藉由完整動力學分析測定。 三種人源化MZ-2抗體(hMZ-2L(參見圖5C)、MK-1(參見圖5D)及hMZ-2Lw(參見圖5E))及嵌合MZ-2(cMZ-2)抗體(參見圖5B)之KD值類似。 利用習知程序(例如，藉由使用能特異性結合至編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡聚核苷酸探針)很容易單離及定序編碼單株抗體之DNA。
較佳地，如上所述之序列一致性係至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。 如本文所使用，術語「人源化抗體」係指含來自非人類(例如，鼠科)抗體及人類抗體之序列之抗體形式。 一般而言，人源化抗體將包括實質上所有至少一個及通常兩個可變域，其中所有或實質上所有超變環對應非人類免疫球蛋白之超變環，且所有或實質上所有FR區係人類免疫球蛋白序列之FR區。 人源化抗體視情況亦將包括(通常)人類免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區之至少一部分。
術語「賦形劑」、「載劑」、「醫藥上可接受之載劑」及類似用語在本文中可互換使用。 如本文所使用，「抗體突變體」或「抗體變異體」係指物種依賴性抗體之胺基酸序列變異體，其中物種依賴性抗體之一或多個胺基酸殘基已經修飾。 此等突變體必定與物種依賴性抗體具有小於100%序列一致性或相似性。
無需進一步詳述，據信熟習此項技術者基於本文描述即可最大限度使用本發明。 如本文所使用，「醫藥上可接受的載劑」為適合個體使用，而無不當的有害副作用(諸如毒性、刺激及過敏反應)且符合合理的效益/風險比者。 同樣，在與醫藥組合物之其他成分相容之意義上，各載體必須係「可接受」。 在與調配物之其他成分相容之意義上，載體必須係「可接受」，且經選擇以最大限度減少活性劑之任何降解及最大限度減少在個體中之任何有害副作用。