抗原呈現細胞的功能是攝取、加工、處理外源性抗原並將加工後抗原呈現給T淋巴細胞，誘導T淋巴細胞進行增殖進而分化成效應細胞，產生免疫反應，以辨識並抵抗感染甚至癌症細 胞。 樹突細胞(Dendritic cells，DCs)是目前所知的人體內功能最強大的抗原呈現細胞，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。 DC的最大特點是能夠顯著刺激初始T細胞進行增殖，而其他的抗原呈現細胞，如巨噬細胞、B細胞僅能刺激已活化的或記憶性T細胞。 因此DC是機體免疫反應的始動者，在免疫反應的誘導中具有獨特的地位。 副甲狀腺癌 外來抗原通常需要經過細胞處理與MHC分子結合後，才能被免疫系統所認知。
也就是說，只有「活化」訊息存在，且「抑制」的訊息異常或不存在時，NK細胞才會進行胞殺作用。 本發明之另一態樣係提供一種增強受試者免疫之醫藥組合物，其包含一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑，以作為活性成分。 在一具體實施例中，相較於未以KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑處理的癌細胞，KIRREL3、CNTN4、及/或CD351之抑制劑可去活化KIRREL3、CNTN4、及/或CD351的功能，或減少其在癌細胞中的活性。 KIRREL3、CNTN4、及/或CD351之抑制劑可包括但不侷限於，化合物、胜肽、胜肽擬物、融合蛋白、抗體、適配體等，其特異地結合至KIRREL3、CNTN4、及/或CD351蛋白質。
副甲狀腺癌: TWI766155B – 抗癌及增強免疫的新穎標的
隨後，將30 μL之MACS緩衝液，其中細胞數目為1×107個細胞，加入所得物中，且將20 μL之抗生物素微珠加入及混合。 接著，利用LS管柱分開CD4+ T細胞與CD8+ T細胞，並計數。 副甲狀腺癌 「核糖核酸酵素」乙詞意指一RNA分子具有類似酵素之功能，其辨識特定鹼基序列並將其切斷。 核糖核酸酵素包含一特異性結合至標的訊息RNA股之互補鹼基序列的區域，以及一切割標的RNA的區域。 將製備之CD4+ T細胞和CD8+ T細胞與1 μL之CFSE (羧基螢光素琥珀醯亞胺基酯)混合，其中細胞數目為2×106個細胞，並在37°C下保存3分鐘。
- 測定KIRREL3、CNTN4、及/或CD351之mRNA表現量的方法可包括但不侷限於，本領域常規習知之任何方法，如反轉錄酶PCR、競爭性反轉錄酶PCR、即時反轉錄酶PCR、RNase保護試驗、北方墨點法、DNA晶片、或RNA晶片。
- 首先，收集該人類血液檢體，並以同體積磷酸緩衝液兩倍稀釋人類血液檢體。
- 將製備之CD4+ T細胞和CD8+ T細胞與1 μL之CFSE (羧基螢光素琥珀醯亞胺基酯)混合，其中細胞數目為2×106個細胞，並在37°C下保存3分鐘。
- 第十二圖A、第十二圖B、第十二圖C、及第十二圖D顯示以CNTN4抑制劑處理肺癌細胞株A549與PBMC時，PBMC的細胞毒性(%)。
- 在本發明之一實施例中，其中上述收集人類血液檢體的步驟係來自於一癌症患者。
這意指，若以阻斷或減量方式中和CD351，則可阻止CD351的T細胞增生抑制作用。 相較於以IgG1處理之對照組，以PD-L1處理之對照組明顯抑制CD4+ T細胞之增生，而相較於以IgG1處理之對照組，其未顯示明顯抑制CD8+ T細胞之增生。 這意指，若以阻斷或減量方式中和CNTN4，則可阻止CNTN4的T細胞增生抑制作用。
副甲狀腺癌: TWI526538B – 培養毒殺型樹突細胞的配方及其方法
在以抗體或siRNA培養PBMCs與癌細胞之混合物24小時後，細胞以7-胺基放線菌素D (7-AAD；BD Pharmingen，San Diego，CA，USA)染色，以檢測溶解的細胞。 測定FL-1 與FL-3 副甲狀腺癌 (7-AAD)染色，以分析PBMC對癌細胞之細胞毒性，其使用FACSDiVa軟體。 本實施例旨在確認，當以KIRREL3、CNTN4、或CD351抑制劑中和KIRREL3、CNTN4、或CD351時，是否增加PBMC對癌細胞的細胞毒性能力。
舉例而言，抑制劑可為抑制所有的KIRREL3、CNTN4、及CD351之活性或表現的物質。 在另一例中，抑制劑可為抑制KIRREL3與CNTN4，或者KIRREL3與CD351，或者CNTN4與CD351之活性或表現的物質。 副甲狀腺癌 在另一例中，抑制劑可為抑制KIRREL3，或者CNTN4，或者CD351之活性或表現的物質。 在另一例中，抑制劑可為KIRREL3抑制劑、CNTN4抑制劑、及CD351抑制劑的組合。 在另一例中，抑制劑可為KIRREL3抑制劑與CNTN4抑制劑的組合，或者KIRREL3抑制劑與CD351抑制劑的組合，或者CNTN4抑制劑與CD351抑制劑的組合。 如申請專利範園第1項所述之方法，其中該分離出之該毒殺型樹突細胞的數量，為人類血液檢體中篩選出之毒殺型樹突細胞數量的200至400倍。
副甲狀腺癌: TWI526538B – 培養毒殺型樹突細胞的配方及其方法
KIRREL3抑制劑、CNTN4抑制劑、及CD351抑制劑的種類可相同或彼此不同。 如申請專利範園第1項所述之方法，其中於該步驟以及步驟之間，更包含下列步驟：收集未附著的細胞；處理該些細胞以得到一第一沈澱物；利用該配方回溶該第一沈澱物；以及靜置一第二合適時間。 進一步說明的是，上述步驟S1004可藉由一流式細胞檢測技術或一磁珠分選技術來完成。 以流式細胞檢測技術為例，步驟S1004包含下列步驟：首先，檢測週邊血單核細胞群組中之B細胞表面標記與T細胞表面標記的表現。 如前面名詞定義所述，B細胞表面標記係指會表現於B細胞之細胞表面標記，如CD19等，而T細胞表面標記係指會表現於T細胞之細胞表面標記，如CD3等。 因此，後續步驟將進一步去除B細胞表面標記與T細胞表面標記呈現陽性者，亦即剩下即為細胞表面標記具有CD3-與CD19-表現之細胞。
第十八圖A、第十八圖B、第十八圖C、及第十八圖D顯示以CD351抑制劑處理結腸癌細胞株HCT-116與PBMC時，PBMC的細胞毒性(%)。 第十七圖A、第十七圖B、第十七圖C、及第十七圖D顯示以CD351抑制劑處理肺癌細胞株A549與PBMC時，PBMC的細胞毒性(%)。 第十五圖A、第十五圖B、第十五圖C、及第十五圖D顯示以CNTN4抑制劑處理胃癌細胞株MKN-74與PBMC時，PBMC的細胞毒性(%)。 第十四圖A、第十四圖B、第十四圖C、及第十四圖D顯示以CNTN4抑制劑處理乳癌細胞株MDA-MB-231與PBMC時，PBMC的細胞毒性(%)。
副甲狀腺癌: TWI766155B – 抗癌及增強免疫的新穎標的
實施例 雖然下文詳述本發明多個實施例之配方及培養方法，但應瞭解本發明可提供許多可在多種具體背景下實施的實用發明概念。 本文所述之具體實施例僅係製備及使用本發明之具體方式的例示性說明且並不界定本發明之範疇。 本文所定義之術語具有熟習與本發明相關領域之一般技術者通常理解之含義。 副甲狀腺癌 諸如「一(a、an)」及「該」等術語非欲僅指單數實體，而是包括可使用具體實例說明之一般類別。
同時，本發明之另一態樣為提供受試者一種增強免疫的方法，其包含投予受試者一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑。 在彼等方法中，除非另有特別說明，否則相關術語與上述醫藥組合物所解釋之術語具有相同含義。 本發明提供一種用於治療或預防癌症的醫藥組合物，其包含一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑，以及一種治療或預防癌症的方法，其係係向有需求之受試者投予一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑。 此外，本發明提供一種用於增強免疫的醫藥組合物，其包含一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑，以及一種增強免疫的方法，其係係向有需求之受試者投予一或多個KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑。
副甲狀腺癌: TWI526538B – 培養毒殺型樹突細胞的配方及其方法
因此，發明人進一步地研發出培養此種毒殺型樹突細胞的配方及其培養方法，運用本發明所提供的方法能使週邊血中微量的毒殺型細胞擴增至200至400倍，將使毒殺型樹突細胞在癌症免疫療法的研究及應用上具有重大性的突破。 篩選抗癌劑的方法係基於本發明之新穎揭示，其中抑制KIRREL3、CNTN4、及/或CD351之活性或表現可抑制癌細胞逃避T細胞的功能。 本發明之篩選方法極其有利，係因其容許通過簡單且廉價的方法，輕鬆地開發新穎之抗癌劑。 在一具體實施例中，相較於未以KIRREL3、CNTN4、及CD351之抑制劑處理的癌細胞，KIRREL3、CNTN4、及/或CD351之抑制劑可減少癌細胞中KIRREL3、CNTN4、及/或CD351的表現。
