在一些具體實施例中，流動相D進一步包括15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3。 在一些具體實施例中，流動相D包括15 mM甲酸銨之水溶液與乙腈；以及pH值為約8.3，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。 在一些具體實施例中，流動相C包括15 mM甲酸銨之水溶液。 在一些具體實施例中，流動相C包括15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3。 在一些具體實施例中，流動相C包括乙腈與15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。
在一些具體實施例中，流動相B係以體積百分比5-25%至80-100%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 在一些具體實施例中，流動相B係以體積百分比5-15%至90-100%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 在一些具體實施例中，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 利拉魯肽 在一些具體實施例中，依據梯度表3，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 在一些具體實施例中，依據表1之梯度，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
將187.8 mg之粗司美格魯肽溶於2.125 mL之六氟異丙醇溶液(含有17% HFIP之0.2% TFA溶液)中。 以33%之氫氧化銨將含有85.87%純度之司美格魯肽分液調整至pH值為8.3，並以pH值為8.3之15 mM甲酸銨稀釋，隨後置於具有管柱(其填充C8之10 μm二氧化矽，且直徑與長度為4.6 利拉魯肽 mm x 100 mm)之RP-HPLC系統中。 在一些具體實施例中，第一次RP-HPLC純化係於pH值小於7之下進行；以及第二次RP-HPLC純化係於pH值大於約7之下進行。 在一些具體實施例中，第一次RP-HPLC純化係於pH值小於3之下進行；以及第二次RP-HPLC純化係於pH值大於約7之下進行。 在一些具體實施例中，第一次RP-HPLC純化係於pH值小於3之下進行；以及第二次RP-HPLC純化係於pH值大於約7.5之下進行。
在某些具體實施例中，流動相C的pH值為約7.5至約8.5。 在一些具體實施例中，經純化之司美格魯肽分液之pH值為約7.5至約8.5。 在一些具體實施例中，經純化之司美格魯肽分液之pH值為約8.0至約8.5。 人類昇糖素類似胜肽-1 (GLP-1)受體協同劑包括艾塞那肽、利拉魯肽、拉糖肽、利司那肽及司美格魯肽。 其中，人類昇糖素類似胜肽-1 (GLP-1)之同系物司美格魯肽(商品名胰妥讚)與利拉魯肽(商品名胰妥善)顯示可作為飲食與運動的添加劑，以改進成人第2型糖尿病的血糖控制。 儘管已有上述純化方法，目前仍需開發更高效並經改良的利拉魯肽純化方法。
利拉魯肽: 利拉魯肽
將19.5 g利拉魯肽粗肽溶於238 mL六氟異丙醇（HFIP）溶液（0.2% TFA溶液中含17% HFIP）中。 將所取得的溶液裝載於填充C8，10 μm矽膠的RP-HPLC製備管柱中，管柱直徑和長度為8 cm × 12.6 cm，裝載量為27.1 g。 「約」一詞係指一數值範圍，其中包括給定值，對本發明技術領域中具通常知識者而言，該數值範圍與該給定值合理近似。 在某些具體實施例中，「約」一詞係指位於可接受習知測量方法所測得的一個標準差內。 在某些具體實施例中，「約」一詞係指位於該給定值+/- 10%的範圍內。 第一次使用Saxenda善纖達注射筆時，醫師與護理師會親自詳細示範操作步驟，並協助注射藥劑，讓您6秒鐘就能輕鬆上手，不需要擔心使用問題與技巧。
「約」意指一範圍之數值，包括指定值，其中本發明所屬技術領域中具有通常知識者將合理地認為與指定值相似。 在一些具體實施例中，術語「約」意指使用本領域通常可接受之測量時在標準差之內。 在一些具體實施例中，約意指範圍擴展至指定值的+/- 10%。 將所取得的溶液裝載於填充C8/10 μm矽膠的RP-HPLC製備管柱中，管柱直徑和長度為10 mm × 25 cm，裝載量為0.99 g。 將990.3 mg利拉魯肽粗肽溶於11.22 mL六氟異丙醇（HFIP）溶液（0.2%TFA溶液中含17%HFIP）中。 將所取得的溶液裝載於填充C8，10 μm矽膠的RP-HPLC製備管柱中，管柱直徑和長度為5 cm × 22 cm，裝載量為19.5 g。
利拉魯肽: 利拉魯肽
如申請專利範圍第6項所述之方法，其中步驟中的溶液包含體積百分比15-20%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和0.1-1%的氟化酸。 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中步驟中的溶液包括體積百分比5-35%的氟化醇和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比10%至60%的銨鹽水溶液。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比20%至60%、30%至60%、4%至60%或約50%的銨鹽水溶液。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比約50%的銨鹽水溶液。
如申請專利範圍第9項所述之方法，進一步包含：使用包含鈉鹽、水和乙腈的流動相E對步驟中的組份進行第三次RP-HPLC純化；且收集組份以獲得鹽交換(salt-exchanged)的利拉魯肽。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括銨鹽或磷酸鹽）以及流動相D（包括乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括銨鹽）以及流動相D（包括乙腈）。 利拉魯肽 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括磷酸鹽）以及流動相D（包括乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C及流動相D，各包括一銨鹽或磷酸鹽。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
儘管出於清楚理解之目的，已通過說明與實例之方式針對前述發明進行一些詳細描述，但本領域技術人員將理解到，在所附申請專利範圍之範疇內可實施特定改良與修正。 此外，本文中提供之各參考文獻皆全部併入本案以作為參考資料，如同各參考文獻之單獨併入以作為參考資料一般。 當本申請案與本文提供之參考文獻之間存在衝突時，以本申請案為主。 將所得之溶液裝載至RP-HPLC製備型管柱(其填充C8之10 μm二氧化矽，且直徑與長度為10 mm x 25 cm)上。 將所得之溶液裝載至RP-HPLC製備型管柱(其填充C8之10 μm二氧化矽，且直徑與長度為5 cm x 22cm)上。
- 隨後，藉由pH 5.1至pH 4.0之線性pH梯度，沖提出標靶利拉魯肽，其中流動相包括乙醇與20 mM檸檬酸鹽緩衝液。
- 在某些具體實施例中，流動相B於線性梯度下由體積百分比5-15%被沖提至90-100%。
- 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為10 mm x 250 mm時，第三次純化之流速為4至8 mL/min。
- 美国糖尿病协会/欧洲糖尿病研究协会指南推荐糖尿病患者在改变生活方式并使用二甲双胍的同时使用GLP-1RAs；中华医学会糖尿病学分会制定的《中国2型糖尿病防治指南(2013年版)》推荐GLP-1RAs用于三线治疗。
- 如請求項9之方法，其中第一次RP-HPLC純化使用包含三氟乙酸與水之流動相A及包含三氟乙酸與乙腈之流動相B。
- 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 cm × 22 cm至8 cm × 12.6 cm時，第一次純化的流速為約50至200 mL/min。
在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為5至50 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為10至40 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為10至30 mM、15至25 mM或約20 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之銨鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之磷酸鹽的水。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在一些具體實施例中，磷酸鹽為磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之混合物。 利拉魯肽 利拉魯肽 在一些具體實施例中，銨鹽係選自於由甲酸銨、乙酸銨及其混合物組成之群組。 在一些具體實施例中，流動相C進一步包括體積百分比1至10%之量的乙腈。 在一些具體實施例中，流動相C進一步包括體積百分比3至7%之量的乙腈。 在一些具體實施例中，流動相C進一步包括體積百分比約5%之量的乙腈。
在一些具體實施例中，流動相E (稱作E1)包括乙腈與濃度為20 mM之磷酸氫二鈉之水溶液；以及pH值為約8.0，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。 在一些具體實施例中，流動相E (稱作E2)包括乙腈與濃度為20 mM之磷酸氫二鈉之水溶液；以及pH值為約8.0，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。 在一些具體實施例中，流動相C包括乙腈及濃度為20 mM之磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之水溶液且pH值為約7.9；以及流動相D為乙腈，其中磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之重量比率為12與1，以及流動相C之水溶液與乙腈之體積比率為95與5。 在一些具體實施例中，流動相C包括磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之水溶液。 在一些具體實施例中，流動相C包括濃度為20 mM之磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之水溶液。