針對CSF-1R之有用抗體應阻斷CSF-1與CSF-1R之間之結合。 用基於ELISA之分析評估mAb AB21是否能阻斷CSF-1與CSF-1R之間的結合。 簡言之，將1.2 μg/ml濃度之CSF-1R ECD塗佈於96孔盤中隔夜。 洗滌之後，添加經連續稀釋之抗體，且接著將CSF-1配體(100 ng/mL)添加至孔中。 在抗體阻斷之後，使用人類M-CSF生物素化抗體及抗生蛋白鏈菌素過氧化酶綴合物作為二級抗體並使用3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺作為受質以評估抗CSF-1R抗體之阻斷活性。 本發明之實施例係關於新穎抗體，其可以高親和力特異性結合至人類CSF-1R且可為個體提供治療益處。
病理學方面，可以見到會有許多的絨毛、乳狀突起與結節性的特徵的滑膜結構，因此過去命名為色素絨毛結節性滑膜炎。 大多數的單一顆型腱鞘巨細胞瘤多發生在關節腔外，治療上比較容易，手術完整切除即可。 瘤內細胞由組織細胞樣單核細胞，成骨樣多核巨細胞，黃色瘤細胞，慢性炎癥性細胞，含鐵血黃素巨噬細胞和膠原化基質以不同比例混合組成。 此瘤之另一亞型稱腱鞘纖維瘤，臨床上兩者不能區別。
腱鞘巨細胞瘤: 治療
如請求項13之方法，其中該發炎性或免疫性疾病係色素絨毛結節性滑膜炎、骨質疏鬆症、發炎性關節炎或其他發炎性骨侵蝕。 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與第二抗體結合片段連接形成雙特異性抗體。 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含共價連接至該抗體或其抗原結合片段形成抗體-藥物綴合物之藥物綴合物。
如本文所使用，術語「抗體」意指包含至少一個特異性結合至特定抗原(例如CSF-1R)或與特定抗原相互作用之互補決定區的任何抗原結合分子或分子複合物。 術語「抗體」包括免疫球蛋白分子以及其多聚體，該等免疫球蛋白分子包含四條多肽鏈，即藉由二硫鍵互相連接之兩條重鏈及兩條輕鏈。 每條重鏈包含重鏈可變區及重鏈恆定區，該重鏈恆定區包含三個結構域，即CH1、CH2及CH3。 每條輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區包含一個結構域。 VH及VL區可進一步細分成多個互補決定區，間雜有構架區。
腱鞘巨細胞瘤: 手上出現硬塊、腫瘤可能是「腱鞘巨細胞瘤」！一症狀出現要當心
CSF1/COL6A3基因的轉位導致CSF-1蛋白質在腫瘤細胞中過度表現，導致腫瘤細胞召集帶有CSF-1受器的發炎細胞，進而促進腱鞘巨細胞瘤生成。 研究顯示大約有76%腱鞘巨細胞瘤生成和CSF1基因的轉位有關。 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO：2、10、11、12或13之序列，且其中該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO：3、14、15或16之序列。 根據本發明之實施例的抗體可以為全長的(例如IgG1或IgG4抗體)，或可僅包含其抗原結合片段/部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，且可視需要經修飾以改善功能。 瀰漫型腱鞘巨細胞會在關節腔中散生生長，黏附在重要的韌帶、軟骨與肌腱上。
腱鞘巨细胞瘤常常发生在手指，手术时腱鞘巨细胞瘤经常会沿着肌腱和骨头包绕性生长，因此切口经常比较长或者不规则，手术之后切口容易发生皮肤坏死，应该注意每天换药，观察皮肤愈合情况，如… 腱鞘巨细胞瘤属于发生在腱鞘部位比较特殊的一种肿瘤，腱鞘巨细胞瘤属于一种良性肿瘤，不用恐慌。 但属于腱鞘巨细胞瘤有其特点，由于生长在腱鞘周围，腱鞘属于一个封闭很广泛的管道，围绕着人…
腱鞘巨細胞瘤: 手術切除腫瘤！免於復發機會
大多數的單一顆型腱鞘巨細胞瘤多發生在關節腔外，例如生長在手部的肌腱處。 約25%病例切除後複發，極罕見的惡性腱鞘巨細胞瘤亦有過報告。 另一個腱鞘瘤即腱鞘纖維瘤fibroma of the tendon sheath可能為腱鞘巨細胞的亞型也侵犯手指和手的屈側肌腱，臨床形態與巨細胞腱鞘瘤相同，平均發病年齡為30歲，較巨細胞腱鞘瘤發病年齡輕。 一種用於治療由CSF-1R、CSF-1及/或IL-34介導之疾病的方法，其包含：向有需要之個體投與治療有效量的如請求項9之醫藥組合物。 在一些實施例中，特異性結合人類CSF-1R之抗體進一步包含選自IgG1、IgG2或IgG4同功異型物之重鏈恆定區及選自κ亞型或λ同功異型物之輕鏈恆定區。 在MRI的影像之中，腱鞘巨細胞瘤最大的特色，便是腫瘤中因為富含大量的血鐵素（hemosiderin），會在影像中呈現特殊的低訊號，為辨識腱鞘巨細胞瘤的關鍵。
CSF-1與其受體之結合活化信號轉導路徑，包括PI3K/Akt及MAPK路徑，引起單核球/巨噬細胞譜系之細胞的增殖、存活、活動性及分化。 CSF-1R係由造血幹細胞、骨髓細胞，包括單核球巨噬細胞、破骨細胞、樹突狀細胞及微神經膠質細胞，神經祖細胞表現。 骨髓細胞係在先天性免疫及後天性免疫中起重要作用的異質且多功能的細胞。 巨噬細胞可取決於微環境及代謝狀態而分化成不同表型且具有不同的生物功能。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨细胞瘤是什么
與參考核酸分子具有相當大一致性的核酸分子在某些情況下可編碼具有與由該參考核酸分子所編碼之多肽相同或實質上相似之胺基酸序列的多肽。 CSF-1R信號傳導之主要生物作用包括造血前驅細胞向巨噬細胞譜系細胞，諸如巨噬細胞、破骨細胞及微神經膠質細胞之分化，以及其增殖、遷移及存活。 CSF-1(M-CSF)與CSF-1R結合將誘導形成同二聚體並藉由酪胺酸磷酸化誘導激酶活化，由此進一步引起下游PI3K、AKT及MAPK信號傳導。 在本發明之一些實施例中，特異性結合人類CSF-1R之抗體係完整抗體、Fab片段、F(ab’)2片段或ScFv片段。
- 如本文所使用，術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」及類似表述包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在的、可以酶法獲得的、合成的或經基因工程改造的多肽或糖蛋白。
- 腱鞘巨细胞瘤需要治疗，如果不做治疗，通常病情会加重，有破坏局部结构等风险发生。
- 在過去的方法，醫師先進行第一次手術，將膝蓋前方的腫瘤清除。
- 在X光的影像之中，發生在膝關節之腱鞘巨細胞瘤可以見到軟組織腫脹的現象，較少見到骨骼組織的破壞。
- 抗體之抗原結合片段可使用任何適合的標準技術，諸如蛋白水解消化或重組基因工程改造技術，由完整抗體分子得到。
本發明之一些實施例係關於用於治療由CSF-1R介導之疾病的方法，此類疾病可包括癌症。 腱鞘巨細胞瘤 為展示本發明抗體在治療癌症方面之效用，使用鼠類模型。 簡言之，將RKO細胞皮下注射至IL-6 NOG小鼠中，該等小鼠已移入人類PBMC以重建人類免疫系統。 在第8天、第15天及第22天，每次用30 mpk (mg/Kg)、或10 mpk、或30 mpk本發明抗體(例如mAB21)與5 mpk派姆單抗之組合治療小鼠。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨細胞瘤介紹
在嚙齒動物及人體中，巨噬細胞具有兩種主要活化表型，即M1(經典或促發炎)表型及M2(替代性或抗炎)表型(Mantovani A等人, 2002)。 腱鞘巨細胞瘤 M2巨噬細胞分泌抗炎性細胞介素，且其功能與組織修復及血管生成相關。 瀰漫型腱鞘巨細胞瘤手術後，『殘餘』或是『復發』的機會相當的高。 因此，為了減少手術之後的復發機會，目前可選擇在手術之後大約四到六週，給予病患低劑量的放射線治療。
本發明之另一態樣係關於一種用於治療由CSF-1R介導之疾病的醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含治療有效量的特異性結合至人類CSF-1R之抗體或其結合片段。 熟習此項技術者應理解，治療有效量將取決於疾病狀況、患者(性別、年齡、身體狀況等)、投與途徑等。 熟習此項技術者將能夠在不進行過度實驗之情況下鑑別出此類量。
腱鞘巨細胞瘤: 臨床表現
此等結果指示，抗CSF-1R單株抗體mAb AB21之抗原決定基係位於跨越殘基 之區域中。 除ELISA分析外，亦可藉由流動式細胞測量術，使用內源性表現CSF-1R之THP-1細胞株(一種人類單核球細胞株)分析抗CSF-1R抗體與表現CSF-1R之細胞的結合。 簡言之，將THP-1細胞與抗CSF-1R抗體一起培育1小時，接著使用流動式細胞測量術進行分析。 如圖4中所示，本發明之mAb AB21可以一種特異性方式結合THP-1細胞，指示此抗體可識別細胞表面上的CSF-1R。 一旦得到含有一或多個生殖系突變之抗體及抗原結合片段，即可容易地測試其一或多種所希望之特性，諸如改善之結合特異性、增加之結合親和力、改善或增強之拮抗或促效生物特性(視具體情況而定)、降低之免疫原性等。 本發明之範圍內涵蓋以此一般方式獲得的抗體及抗原結合片段。
在其他實施例中，僅某些殘基可回復突變成原始生殖系序列，例如僅FR1之前8個胺基酸內或FR4之後8個胺基酸內所發現的突變殘基，或僅CDR1、CDR2或CDR3內所發現的突變殘基。 在其他實施例中，一或多個構架及/或CDR殘基可突變成不同生殖系序列(亦即，不同於最初得到抗體之生殖系序列的生殖系序列)之相應殘基。 如本文所使用，術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」及類似表述包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在的、可以酶法獲得的、合成的或經基因工程改造的多肽或糖蛋白。 抗體之抗原結合片段可使用任何適合的標準技術，諸如蛋白水解消化或重組基因工程改造技術，由完整抗體分子得到。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨细胞瘤会恶变吗
本發明之一些實施例係關於用於治療發炎性/免疫性疾病之方法。 如圖13中所示，本發明之抗CSF-1R mAb在此活體內結腸直腸癌模型中有效治療癌症且有與檢查點抑制劑組合之潛力。 此等結果清楚地展示，本發明抗體將可用於在臨床上使用以治療癌症。 經由ELISA或BIAcore分析確定本發明之抗體與CSF-1R具有特異性結合。
如圖1及圖2中所示，小鼠融合瘤抗人類CSF-1R抗體與CSF-1R顯示特異性結合。 圖1顯示由ELISA分析得到的結果，其中將M-CSFR/CD115 Fc嵌合體(來自R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN)塗佈於96孔中並添加各種濃度之mAb AB21。 在結合及洗滌之後，使用辣根過氧化酶綴合之二級抗體評估結合之mAb AB21。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨细胞瘤怎么治
另外，雖然這個腫瘤的名稱中有『巨細胞瘤』，但臨床表現與我們骨腫瘤中的『巨細胞瘤』是完全不同的。 腱鞘巨細胞瘤（或又稱色素絨毛結節性滑膜炎）是一種偶而可見的良性軟組織腫瘤，一般多發生在膝蓋，可以分為單顆型與彌漫型兩種。 彌漫型的色素絨毛結節性滑膜炎一般處理起來比較棘手，常常無法手術完全清除乾淨，而會留下症狀不一的後遺症。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨细胞瘤是什么原因引起的
在我們的臨床觀察中，我們可以發現經由這樣『併行』的治療方式，腫瘤可能會在手術後六至十二個月內稍微繼續生長，但最後生長便會停止、甚至腫瘤漸漸的消失。 腱鞘巨細胞瘤，舊稱為色素絨毛結節性滑膜炎是一種偶而可見的良性軟組織腫瘤。 常常病患會經歷幾年這樣的症狀，而找不出原因，最後經由核磁共振提供線索，搭配病理切片才把疾病診斷出來。 最典型的臨床發現，便是醫師可以從病患的膝蓋中，抽出黑紅色的血液狀關節液。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨細胞瘤
為評價抗人類CSF-1R抗體AB21 mAb之結合親和力，使融合瘤在含有15%胎牛血清之IMDM中生長。 培養一週之後，收集1×106個細胞，用PBS洗滌，使其再懸浮於200 µl RPMI培養基中，並藉由IP注射將其注射至嚴重聯合免疫缺陷小鼠體內。 藉由40%硫酸銨及蛋白質A管柱(Montage抗體純化套組，Millipore)進一步純化抗體。 遵循製造商提供之方案，用Amicon Ultra-15離心過濾裝置濃縮純化之抗體。 以上結果清楚地指示，本發明之抗CSF-1R抗體可以高親和力結合活體外及細胞表面上之CSF-1R。 因此，此等抗體應能夠改變由CSF-1R介導之細胞活性。
腱鞘巨细胞瘤，在临床中发病率也是比较高的，多见于青壮年的手部以及手指部，好发于腱鞘及滑囊的滑膜。 腱鞘巨細胞瘤 皮损为圆形或椭圆形的结节，呈坚实性、无痛性的肿块，… 腱鞘巨细胞瘤是好发于手足肌腱周围的良性肿瘤，手术完整切除后复发率较低，但如果切除不彻底容易导致复发，手术本身手术难度不大，但术后康复是影响患者功能的关键，所以手术后早期要进行合…